本生PCR板—96孔板鋪板的小技巧

　　96孔板進(jìn)行鋪板的?當(dāng)細(xì)胞用96孔板接種時(shí)，細(xì)胞經(jīng)常是不均勻分布。第二天就會(huì)發(fā)現(xiàn)有些地方出現(xiàn)堆積性生長(zhǎng)，而還有不少地方細(xì)胞則很稀疏，細(xì)胞密集的地方因細(xì)胞與細(xì)胞之間的接觸抑制影響細(xì)胞的生長(zhǎng)，這樣就很難評(píng)價(jià)干預(yù)因素對(duì)細(xì)胞的作用。因此，將96孔板種均勻也是進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)的將以用的老辦法和用的新方法比較一下，以讓大家看看各自?xún)?yōu)缺。

　　1、老方法：植板后，用手拿起96孔板，左右搖動(dòng)，然后來(lái)回?fù)u動(dòng)幾次，但這種方法通常在2-3個(gè)細(xì)胞的5口井中分布不均勻。  在大多數(shù)情況下，中間的孔會(huì)出現(xiàn)成堆的分布，會(huì)讓人感到一陣麻煩。 再一次，看到一位老師將電路板放在振動(dòng)器上并搖動(dòng)幾分鐘。 結(jié)果更糟。 細(xì)胞都在中間。

　　通常，會(huì)在96孔板的每個(gè)孔上，加入100微升的細(xì)胞懸浮液。把它從左邊加到洞底。加入一半板材后，與未加入的細(xì)胞懸浮液混合，然后繼續(xù)加入剩余的一半板材。蓋上蓋子后，用左手輕輕握住木板的左邊，然后用右手輕拍木板的右邊緣。注意力集中在力量上(通常敲擊它三次)。太多或太多次會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞堆積。順時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)盤(pán)子(逆時(shí)針?lè)较虿缓?  ，將剩下的三面逐一拍打，靜置5分鐘左右，然后放入37度的培養(yǎng)箱中。本生熒光定量PCR板

　　2、新方法：這種方法是非常好，非常均勻播種。使用等速吸引吸取細(xì)胞，然后吸移嘴對(duì)孔(注意尖不接觸孔槍頭底部)的側(cè)壁上，然后再慢慢敲除細(xì)胞吸管定植后，不要搖晃板，它只是可以直接在顯微鏡下被放置，這個(gè)方法可以被說(shuō)成是有效的。

　　補(bǔ)充：從6孔板到96孔板，細(xì)胞應(yīng)均勻分布分散。用培養(yǎng)基進(jìn)行稀釋細(xì)胞，然后將培養(yǎng)板放置在適當(dāng)?shù)奈恢?。添加一個(gè)細(xì)胞時(shí)和之后，請(qǐng)勿移動(dòng)能力培養(yǎng)板;如果在空氣中沒(méi)有介質(zhì)吹入，但是不要移動(dòng)培養(yǎng)板，加入細(xì)胞后，靜置20-30分鐘，然后可以將其移入培養(yǎng)箱。這樣，細(xì)胞結(jié)構(gòu)通常具有均勻生長(zhǎng)。當(dāng)然，提是細(xì)胞消化系統(tǒng)良好。

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